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Pfu DNA Polymerase DNA聚合酶/Pfu DNA 聚合酶 500u

更新時間:2014-05-19 點擊次數(shù):659次

產(chǎn)品可以開票,另有1000u的規(guī)格,~現(xiàn)貨~

Pfu DNA Polymerase

規(guī)格:500U

濃度:5U/ul

保存:-20℃保存, 有效期至少一年。

 

產(chǎn)品簡介:

Pfu DNA Ploymerase 是從克隆有Pyrococcus furiosis DNA Ploymerase 基因的大腸桿菌中表達并經(jīng)過柱純化

分離出來的重組蛋白,其分子量為90kD。由于Pfu 酶具有3’→5’核酸外切酶活性,它能糾正DNA 擴增過程中

產(chǎn)生的錯配,而傳統(tǒng)的Taq 酶卻不能,其它耐熱DNA Polymerase 如Vent、Deep Vent、Tli、UITma 等雖具有校

正功能,但Pfu 酶是目前已發(fā)現(xiàn)的所有耐熱DNA Polymerase 中出錯率zui低的。Pfu 酶無5’→3’核酸外切酶活性,

PCR 反應(yīng)中的延伸速度一般為0.5-1kb/min,比Taq酶要低。Pfu 酶比Taq酶熱穩(wěn)定性更好,95℃ 1小時仍保持

90%以上的活性,對于GC 含量很高的模板,變性溫度可以提高到98℃而不影響其活性。Pfu 酶的PCR 產(chǎn)物為

平末端,可加A 處理再與T-載體連接或使用平末端克隆載體。

活性定義:

1 單位(U) Pfu DNA Polymerase 活力定義為在74℃,30 分鐘內(nèi),以活性化的大馬哈魚精子DNA 作為模板/

引物,將10 nmol 脫氧核苷酸摻入到酸不溶物質(zhì)所需的酶量。

質(zhì)量控制:

SDS-PAGE 檢測Pfu DNA Polymerase 純度大于99%;經(jīng)檢測無外源核酸酶活性;PCR 方法檢測無宿主殘余

DNA;能有效地擴增人類基因組中的單拷貝基因;室溫存放一周,無明顯活性改變。

酶貯存緩沖液:

50mM Tris-HCl (pH 8.2); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% glycerol;其他成份。

適?9?2范圍:

用于DNA 的高保真擴增,如基因表達克隆、基因定點突變、細胞內(nèi)基因點突變的分析(SNP)和末端補平

等。

建議PCR 體系(以50μl 反應(yīng)體系為例)

Template <0.5μg

上游引物(10μM) 1μl

下游引物(10μM) 1μl

10×Buffer(含Mg2+) 5μl

dNTP(各2.5mM) 4μl

Pfu DNA Polymerase 0.5-1μl

ddH2O up to 50μl

注意事項:

1、PCR 反應(yīng)體系加樣時,zui后一步加入Pfu DNA Ploymerase,整個過程宜在冰上操作。

Solarbio

Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd

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2、取Pfu DNA Ploymerase 做PCR 反應(yīng)時,請用高壓滅菌處理過的吸頭。

3、10×Pfu Buffer 中含20 mM Mg2+,如PCR 反應(yīng)需要較高Mg2+濃度,請另行加入。

4、 用Pfu 酶擴增時,引物的純度要求較高,引物長度大于18 個堿基,Tm值在55-80℃之間,引物濃度在0.1-0.5uM

之間,比Taq 酶略高。

相關(guān)產(chǎn)品:

2×Pfu PCR MasterMix (含染料)

dNTPs Mix(10mM each)

10×DNA 上樣緩沖液

50×TAE 緩沖液

GoldView II 型核酸染色劑(5000×)

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