產(chǎn)品可以開票,另有1000u的規(guī)格,~現(xiàn)貨~
Pfu DNA Polymerase
規(guī)格:500U
濃度:5U/ul
保存:-20℃保存, 有效期至少一年。
產(chǎn)品簡介:
Pfu DNA Ploymerase 是從克隆有Pyrococcus furiosis DNA Ploymerase 基因的大腸桿菌中表達并經(jīng)過柱純化
分離出來的重組蛋白,其分子量為90kD。由于Pfu 酶具有3’→5’核酸外切酶活性,它能糾正DNA 擴增過程中
產(chǎn)生的錯配,而傳統(tǒng)的Taq 酶卻不能,其它耐熱DNA Polymerase 如Vent、Deep Vent、Tli、UITma 等雖具有校
正功能,但Pfu 酶是目前已發(fā)現(xiàn)的所有耐熱DNA Polymerase 中出錯率zui低的。Pfu 酶無5’→3’核酸外切酶活性,
PCR 反應(yīng)中的延伸速度一般為0.5-1kb/min,比Taq酶要低。Pfu 酶比Taq酶熱穩(wěn)定性更好,95℃ 1小時仍保持
90%以上的活性,對于GC 含量很高的模板,變性溫度可以提高到98℃而不影響其活性。Pfu 酶的PCR 產(chǎn)物為
平末端,可加A 處理再與T-載體連接或使用平末端克隆載體。
活性定義:
1 單位(U) Pfu DNA Polymerase 活力定義為在74℃,30 分鐘內(nèi),以活性化的大馬哈魚精子DNA 作為模板/
引物,將10 nmol 脫氧核苷酸摻入到酸不溶物質(zhì)所需的酶量。
質(zhì)量控制:
SDS-PAGE 檢測Pfu DNA Polymerase 純度大于99%;經(jīng)檢測無外源核酸酶活性;PCR 方法檢測無宿主殘余
DNA;能有效地擴增人類基因組中的單拷貝基因;室溫存放一周,無明顯活性改變。
酶貯存緩沖液:
50mM Tris-HCl (pH 8.2); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% glycerol;其他成份。
適?9?2范圍:
用于DNA 的高保真擴增,如基因表達克隆、基因定點突變、細胞內(nèi)基因點突變的分析(SNP)和末端補平
等。
建議PCR 體系(以50μl 反應(yīng)體系為例)
Template <0.5μg
上游引物(10μM) 1μl
下游引物(10μM) 1μl
10×Buffer(含Mg2+) 5μl
dNTP(各2.5mM) 4μl
Pfu DNA Polymerase 0.5-1μl
ddH2O up to 50μl
注意事項:
1、PCR 反應(yīng)體系加樣時,zui后一步加入Pfu DNA Ploymerase,整個過程宜在冰上操作。
Solarbio
Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd
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2、取Pfu DNA Ploymerase 做PCR 反應(yīng)時,請用高壓滅菌處理過的吸頭。
3、10×Pfu Buffer 中含20 mM Mg2+,如PCR 反應(yīng)需要較高Mg2+濃度,請另行加入。
4、 用Pfu 酶擴增時,引物的純度要求較高,引物長度大于18 個堿基,Tm值在55-80℃之間,引物濃度在0.1-0.5uM
之間,比Taq 酶略高。
相關(guān)產(chǎn)品:
2×Pfu PCR MasterMix (含染料)
dNTPs Mix(10mM each)
10×DNA 上樣緩沖液
50×TAE 緩沖液
GoldView II 型核酸染色劑(5000×)
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